大鼠DNA甲基化转移酶(DNMT)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　大鼠DNA甲基化转移酶(DNMT)ELISA试剂盒的实验使用说明书通常包含以下内容，但请注意，具体说明可能因不同制造商和试剂盒版本而有所差异。以下是一个基于通用标准的概述：

　　BS-8543   大鼠DNA甲基化转移酶(DNMT)ELISA试剂盒

　　一、产品概述

　　‌用途‌：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中DNA甲基化转移酶(DNMT)的含量，仅供研究使用。

　　二、实验原理

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠DNA甲基化转移酶(DNMT)水平。用纯化的大鼠DNA甲基化转移酶(DNMT)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体。往包被的微孔中依次加入大鼠DNA甲基化转移酶(DNMT)，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠DNA甲基化转移酶(DNMT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大鼠DNA甲基化转移酶(DNMT)含量。

　　三、试剂盒组成

　　试剂盒通常包含酶标包被板、标准品、酶标试剂、样品稀释液、显色剂A液、显色剂B液、终止液、浓缩洗涤液等组件，具体数量和配置可能因试剂盒规格(如48孔或96孔)而异。

　　四、样本采集与处理

　　‌血清‌：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

　　‌血浆‌：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。

　　‌尿液‌：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

　　‌细胞培养上清‌：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。

　　‌组织标本‌：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS(PH7.4)。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。

　　标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

　　五、实验步骤

　　‌标准品的加样‌：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品。

　　‌加样‌：在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液，然后再加待测样品。加样时将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　‌加酶‌：每孔加入酶标试剂(空白孔除外)。

　　‌温育‌：用封板膜封板后置37℃温育一定时间。

　　‌配液‌：将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释后备用。

　　‌洗涤‌：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置后弃去，重复多次，拍干。

　　‌显色‌：每孔加入显色剂A和B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色。

　　‌终止‌：每孔加终止液，终止反应。

　　‌测定‌：以空白孔调零，在450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。

　　六、注意事项

　　试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡一段时间后方可使用。

　　浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

　　各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性。

　　封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　底物应避光保存。

　　严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

　　七、性能与保存

　　‌性能‌：样品线性回归与预期浓度相关系数R值通常高于0.95，批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15%。

　　‌保存‌：试剂盒应保存在2-8℃，有效期通常为6个月。

　　请注意，以上信息为通用标准概述，具体实验时应严格遵循所使用试剂盒的说明书进行操作。