清瘟败毒片中非法添加三磷酸核苷竞争性抑制剂(GS-441524)的整体解决方案—农业农村部公告第801号

基质：清瘟败毒片

样品提取：

取供试品10片，研细，称取1.0 g，置50 mL离心管中，加提取液[0.1 mol/L盐酸溶液-乙腈（1:1）]20 mL，涡旋混匀，振摇20 分钟，离心（每分钟9000转）5 分钟；取上清液1.0 mL，置10 mL量瓶中，用0.1%甲酸溶液稀释至刻度，摇匀，过0.45μm PTFE针式滤器，作为供试品溶液。

另取三磷酸核苷竞争性抑制剂（GS-441524）对照品适量，用0.1%甲酸溶液溶解并稀释制成每1mL中约含1 μg的溶液，作为对照品溶液。

加标样品：加标水平200 mg/kg（对应上机溶液浓度1μg/mL）。

液相色谱

a) 色谱柱：Athena UHPLC C18 液相色谱柱，2.1 mm×100mm，粒径1.8 μm（货号：LAEQ-2110UA）；

b) 流动相：甲醇：50 mmol/L甲酸铵溶液=20:80；

c) 流速：0.3 mL/min；

d) 柱温：30°C；

e) 进样量：5 μL；

f）波长范围：二极管阵列检测器，采集波长范围为200~400 nm，记录246 nm波长处的色谱图。

图1 三磷酸核苷竞争性抑制剂标准溶液谱图（1 μg/mL）

图2 样品加标（上）和样品空白（下）叠图谱图（样品加标1 μg/mL）

清瘟败毒片样品的加标回收率数据见下表。

使用标准品和相关耗材，参照中华人民共和国农业农村部公告 第801号《清瘟败毒片中非法添加三磷酸核苷竞争性抑制剂（GS-441524）检查方法》，对于清瘟败毒片样品中三磷酸核苷竞争性抑制剂进行检测，峰形良好，加标回收率在90%左右，RSD小于5%，该方法操作简便稳定。标准品、色谱柱等相关耗材能够很好的满足清瘟败毒片等基质中三磷酸核苷竞争性抑制剂含量的检测。