DNase I——单细胞前处理隐藏但必用的实用酶

• 试剂：DNase I（Cat#10325ES）、胎牛血清FBS（Cat#40130ES）、HBSS（不含钙、镁离子和酚红）（Cat#60148ES）、RPMI培养基（Cat#41402ES）、PBS缓冲液（Cat#41403ES）、胶原酶IV（Cat#40510ES）

• 耗材：2 mL离心管（Cat#83504ES）、50 mL离心管（Cat#80507ES）、细胞过滤器70 μm（Cat#84702ES）

• 仪器：离心机、移液器

1、FACS缓冲液：在500 mL PBS中加入2%的胎牛血清FBS（v/v）和22 mM EDTA。

2、消化液：在RPMI培养基中制备2 mL由200 U/mL胶原酶IV和0.5 U/mL 脱氧核糖核酸酶I（DNase I）组成的消化液。

注：不同的样本，需要的胶原酶类型不一样。

3、小鼠样本肺部组织分离。

4、将肺组织加入含有300 μL消化液的2 mL 离心管中，用剪刀将肺组织在离心管中剪成小块。

5、加入700 μL的消化液后，摇床上800 rpm 37℃孵育30 min。

6、将离心管取出后置于冰上孵育2 min。

7、加入40 μL 500 mM的EDTA溶液，冰上孵育2 min。

8、将70 μm的细胞过滤器置于50 mL离心管上，用FACS缓冲液润湿细胞过滤器。

9、将肺组织细胞悬液加入细胞过滤器上进行过滤。

10、加入9 mL FACS缓冲液到细胞过滤器上冲洗剩余的细胞。

11、扔掉细胞过滤器，将含有细胞悬液的50 mL离心管盖上管盖后，380 g离心7 min。

12、将细胞悬液用2 mL FACS缓冲液重悬细胞。

13、样本显微计数。

翌圣生物科技（上海）股份有限公司成立于2014年，是一家聚焦生命科学产业链上游核心原料，从事核苷酸、蛋白、细胞和类器官四大品类生物试剂的研发、生产与销售的高新技术企业。公司兼备核心技术自主研发和规模化生产能力，核心产品数量达数千种，覆盖分子克隆、qPCR、NGS、体外转录、抗体、蛋白纯化及分析、细胞培养、转染、报告基因检测和类器官等多种系列，广泛应用于生命科学研究、诊断检测和生物医药等领域。