微生物鉴定微生物的分离方法

在自然界中，微生物混杂在一起，如果想要得到所需要的菌种，必须从中分离出它们。在保存菌种时如果菌种不小心受到污染，也需要对菌种进行分纯。微生物有很多不同分离和纯化的方法，可是它们的却有着相似的基本原理，就是一定地稀释待分离的样品，并且尽量分散微生物的细胞(或孢子），然后让它们长成一个个纯种单菌落。但是上述工作又必须要接种，就是把一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。下面就让小编介绍一下微生物的分离方法。 

平板划线分离法

在平板培养基表面，接种环通过分区划线从而达到微生物分离的一种方法被称为平板划线分离法。平板划线分离法的原理是在固体培养基表面把微生物样品多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。

1.把溶化牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒在平板上，水平静放等待凝固。

2.将接种环用酒精灯光焰灼烧，冷却后吸取接种环金黄葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液。

3.左手握琼脂平板稍抬皿盖，同时靠近火焰，右手将接种环伸入皿内，在平板上一个区域作Z形回划线，划线时使接种环与平板表面成30-40°角度轻轻接触，在平板表面轻轻地滑动，不要划破平板表面或者滑进增基内。

4.将接种环灼烧，从而把接种环上尚残留的菌液杀灭，等冷却后，将接种环伸入皿中，在diyi区域划过线的地方轻轻接触一下后，转动90°，在第二区域继续划线。

5.划线完成后再将接种环灼烧，冷却后用相同方法在其他区域划线。

6.完成全部划线后，在平皿底用特种蜡笔注明菌种、日期、组别、姓名。将整个培养皿倒置于恒温培养箱培养。

7.在温度37℃下经过24-48小时培养后取出观察。观察菌落的开关、大小、颜色、边缘、表面结构、透明度等性状。

稀释分离法

经过连续地稀释让被分离的样品达到Zdi限度的分散。之后吸取一定量的样品注入平板和温度适合溶化了的琼脂培养基混合，如此，分散的细菌就会在原处被固定从而形成单菌落。

1.用无菌水将大肠杆菌或酵母菌制作成菌悬液。

2.取若干无菌试管，在每只无菌试管内盛放9ml无菌水。

3.吸取1ml制备好的菌悬液，放到diyi支含有9ml无菌水的试管内，这样就稀释了10倍

4.从diyi支试管内吸取1ml注入第二支含有无菌水的试管内，这样就稀释了100倍

5.如此这般一直稀释到两个合适的稀释度。

6.分别精确吸取两个合适的稀释度0.2ml加入编好号的空无菌平皿中，同一稀释度重复做三个平皿。

7.向上述各平皿内倒入已溶化并冷却至45℃的琼脂培养基，轻轻旋转充分混匀培养基与菌悬液，凝固后倒置于37℃或38℃度恒温箱中培养24-48小时，观察平板上菌落生长和分布情况。