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不同的物质在一定的电场强度下,因为所带电荷不同,所以受到的引力不同,往相反的电极泳动的速度不同从而达到分离的目的。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离目的的技术,称为电泳技术。
主要结构:
缓冲液的主槽、凝胶托盘、试样格(梳子)、挡板和电泳导线共同组成水平电泳槽。
使用方法:
1.首先在平台上放置凝胶托盘,在槽中插入挡板。冷却融化的琼脂糖溶液到55摄氏度,使用少量的琼脂糖凝胶封边玻璃板,放样品梳。然后连续地往模子里倒入融化的琼脂糖溶液(厚度取决于样品的浓度,需要防止混入气泡),在室温条件下凝固。
2.等到凝胶聚合后,将梳子轻轻地拔掉,先拔一边,垂直拔出会导致胶孔产生真空,带出部分凝胶。往电泳槽内移入凝胶托盘,将缓冲液倒入,凝胶必须全部被浸没。
3.往梳井里加样,防止气泡进入,不能将枪头插入太深,避免使得胶块穿透。
4.将上盖盖好,将电泳槽和电源之间的电泳导线连接。
5.留意正负极不要接错,检查完毕后将电泳仪电源打开。电压和电流的大小通过凝胶板的厚薄来选择。
6.当溴酚蓝指示剂前沿达到胶底部的3/4时将电泳停止。在完成电泳实验后,需先将电泳仪电源关闭,然后将电泳导线拔出,再将电泳槽上盖打开,将凝胶托盘取出。
7.往染色区的通风橱子中移入凝胶使用EB染色液进行10-20min的染色,然后使用冲洗盘将胶片上多余的EB染色液冲洗掉,再使用海绵进行两次彻底的吸水,直到没有水痕留在胶片上,使用保鲜膜将胶片包裹好,放入凝胶成像仪中进行凝胶成像。
注意事项:
1.不允许将EB染色液加入电泳槽中,必须在电泳结束后且在染色区内进行染色。
2.正负级分不清楚,造成样品跑入缓冲液。黑色为负极,红色为正极,样品由负极往正极跑,需在靠近负极一端加样。
3.加样的时候,不能将枪头插得太深,避免胶块被穿透。
4.必须按照marker要求的浓度对胶的浓度进行制备,不然,小分子物质会从胶块中跑出。
5.若没有经验,Z好定时,不然样品可能因为疏忽从胶块中跑出。
6.样品必须在上样缓冲液中完全溶解,不然在凝胶中不能移动。采用同种缓冲液制胶和电泳,点样必须在缓冲液加到凝胶之上以后。
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