细胞到货处理实操要点
THP-1
1. 悬浮细胞(以 THP-1 为例)
操作流程:
检查包装完好后,酒精消毒培养瓶;
显微镜观察细胞状态(均匀悬浮、无碎片);
转移培养基至离心管,1000 转 / 10 分钟离心收集细胞;
用完全培养基重悬细胞,按 1:2 传代(避免传代过稀)。
注意事项:操作轻柔,避免吹打损伤细胞;离心后可用肉眼确认细胞沉淀。
BV-2
2、半贴壁细胞(以 BV-2 为例)
操作流程:
收集T25瓶内全部培养基(内含悬浮细胞),离心备用;
PBS 润洗贴壁细胞 2 次,加入 1mL 胰酶消化;
用含血清的完全培养基终止消化,收集细胞悬液;
与步骤①的离心沉淀合并,再次离心后传代。
关键细节:消化时需随时观察细胞脱落情况,避免过度消化。
HUVEC
3. 贴壁细胞(以 HUVEC 为例)
操作流程:
弃去培养基,PBS 清洗细胞 2 次;
加入胰酶消化(贴壁较紧的细胞可适当延长时间);
完全培养基终止消化,吹打收集细胞;
离心后按 1:2 传代,标记培养条件及日期。
注意事项:消化后需确保细胞完全脱落,传代时避免吸入气泡。
293F
4. 聚团悬浮细胞(以 293F 为例)
操作流程:
检查离心管密封,酒精消毒后轻柔取出细胞;
直接离心(避免吹散细胞团),用完全培养基重悬;
传代时轻轻混匀,避免破坏细胞团结构。
关键细节:细胞团状态直接影响生长,操作需格外轻柔。
观众的问题与解答
A: 不需要,常规离心机(室温)即可。
A: 贴壁细胞消化 2-3 分钟,观察到细胞变圆脱落即可,避免过度消化导致细胞死亡。
A: 建议首次 1:2 传代,根据细胞生长速度调整,避免传代过稀影响贴壁或增殖。
A: 不同细胞需匹配对应培养基(如 THP-1 用 1640,HUVEC 用内皮专用培养基)。
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