细胞污染类型与处理指南
特征:
培养基变黄、浑浊,显微镜下可见大量游动的小黑点(低倍镜)或球菌 / 杆菌(高倍镜)。
细胞形态异常(拉丝、长角),生长受抑制。
处理方法:
用双抗(青霉素 + 链霉素)冲洗细胞,更换培养基;
若污染严重,直接丢弃细胞并消杀培养箱。
预防措施:
规范操作(瓶盖朝上、避免长时间敞开培养基);
定期检查培养基和胰酶是否污染(空培测试)。
特征:
肉眼可见培养基中白色或灰色菌落,后期长满培养瓶,培养基颜色无明显变化。
感染初期难以察觉,发现时已属后期。
处理方法:
直接丢弃细胞,彻底消杀培养箱和细胞房(真菌难以根除)。
预防措施:
梅雨季节增加超净台和培养箱的消毒频率;
避免不同细胞交叉使用耗材。
特征:
细胞生长缓慢、形态变丑,碎片增多,培养基颜色无明显变化。
需通过 QPCR 检测或显色试剂盒确诊。
处理方法:
使用支原体清除剂(如富衡支原体清除剂)加入培养基,传代培养 3-5 代;
严重时丢弃细胞,用喷雾型清除剂消杀环境。
预防措施:
操作时佩戴口罩,避免口腔气流污染;
定期用QPCR检测细胞支原体状态。
特征:
显微镜下可见大量黑色小点游动,密集时覆盖细胞,导致细胞死亡。
来源可能为血清污染。
处理方法:
使用黑胶虫清除剂(如富衡黑胶虫清除剂),配合频繁换液;
若无效,丢弃细胞并更换血清。
预防措施:
选择优质血清(如富衡特级胎牛血清);
传代时避免交叉污染。
污染预防核心措施
| 预防方向 | 具体操作 |
| 个人操作规范 |
|
| 超净台管理 |
|
| 环境与耗材 |
|
| 季节特殊处理 | 梅雨季节增加细胞房消杀频率,使用 “细胞金盾” 系列产品(如培养箱除菌剂、水盘抑菌剂)。 |
常见问题与解答
A: 观察颜色:正常为粉红色,发黄 / 浑浊可能污染;显微镜下观察是否有异物。
A: 推荐 QPCR 检测法,灵敏度高于显色试剂盒,可检测低浓度污染。
A: 增加消毒频率,使用水盘抑菌剂,避免长时间敞开放置培养基,定期观察细胞状态。
A: 细菌污染可尝试双抗处理,真菌以及严重支原体污染建议丢弃,避免蔓延。
细胞污染预防重于治疗,规范操作和环境消杀是关键,辅以专业清除剂可提高挽救成功率。
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