ADC药物的药物抗体偶联比(DAR)分析

内容概要

抗体偶联药物（ADC）作为一种生物ZL候选药物是近年来的研究热点。ADC药物是将单克隆抗体的肿瘤特异性和靶向性与GX的小分子药物的细胞毒性结合成一个新的药物分子，从而形成有效的kang癌ZL剂。这些分子由三部分组成：单克隆抗体、稳定的连接物以及细胞毒性小分子药物。

ADC药物的药效和清除率都与药物抗体偶联比（DAR）值有关，因此在药物开发过程中必须对其精确分析。尺寸排阻色谱法和疏水色谱法是在天然生理条件下检测DAR的两种Z常用的方法。

在本应用中，我们通过SEC-MS和HIC-UV法来对一个半胱氨酸偶联的ADC药物模拟物进行分析。该模拟物是由LC-SMCC交联剂将丹磺酰基萤光团共价键合到IgG1-mAb上，形成一个载药量不同（0-8）的抗体混合物。

图1. 半胱氨酸偶联的ADC模拟物

图2. 半胱氨酸偶联的ADC的异质性

实验部分

在SEC-MS方法中，我们选用了TSKgel SuperSW3000尺寸排阻色谱柱。将ADC注入该色谱柱中，HPLC系统与质谱相连，用于检测DAR谱图。

从谱图中观察到，每个主峰之间的分子量差异为1336 Da，对应两个丹磺酰基荧光团分子的分子量。SEC/MS分析表明，平均DAR为3.9 。

图3. ADC模拟物的SEC/MS谱图

然后，使用TSKgel Butyl-NPR疏水色谱柱和UV检测，来确认DAR分布情况。mAb抗体结合的药物分子数越多，ADC的疏水性越大，在HIC固定相上的保留时间更长，载药量不同的组分便可得到分离。从DAR谱图中可以看到，DAR=0-8的各峰之间分离情况很好。

图4. ADC模拟物的HIC-UV谱图

结果与讨论

SEC-MS和HIC-UV是有效表征ADC的DAR谱图的两种方法。在TSKgel SuperSW3000色谱柱上，使用了质谱兼容的流动相，通过高分辨率ESI-MS检测，验证药物模拟物中ADC组分的分子量。

HIC-UV方法中，使用TSKgel Butyl-NPR色谱柱对样品中各种抗体-载荷的ADC异构体进行疏水性分析，进一步确认其DAR分布。结合这两种分析方法，可以有效验证ADC生物大分子的DAR谱图。