先说结论
胰酶消化细胞的原理
胰蛋白酶（Trypsin）简称胰酶，是一种丝氨酸水解酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切段，水解细胞间的蛋白质，破坏细胞间的连接，从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。
胰酶的工作条件
胰酶分散细胞的活性与组织或细胞的特性、胰酶浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0和37℃时，胰酶的作用能力最强，因此使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。
一般常用胰酶的工作浓度为0.25%，而半贴壁细胞或对胰酶敏感的细胞常采用低浓度（0.05%）的胰酶进行细胞消化。由于EDTA能够螯合Ca2+和Mg2+，从而破坏细胞连接促进细胞的解离，因此在胰酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用，以增强解离效果。
细胞密度图
消化步骤
贴壁细胞的消化
1) 吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
2) 加入少量胰酶细胞消化液（含酚红），略盖过细胞即可,室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。
3) 显微镜下观察,细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化，或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来；此时吸除胰酶细胞消化液；加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
4) 如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化。
5) 如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
组织的消化
不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
消化过渡的后果
如果胰酶消化时间过长或浓度过高，可能会导致细胞表明重要蛋白过渡消化，影响细胞的生存和功能，使细胞膜损伤，细胞粘附能力下降，生长因子受体损伤，生长受阻，或者细胞死亡等后果。
为什么有些胰酶是粉红色的？
因为这些胰酶添加了酚红，酚红在培养基中常用来作为PH指示剂，中性时为红色，酸性时黄色，碱性时为紫色。在-20℃中溶液pH变酸，胰酶呈现橙黄色，温度恢复后变回红色，颜色的变化不影响正常使用。
胰酶使用注意事项
1、由于不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样，因此操作人员应根据实际情况，确定最佳消化时间；消化细胞时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁和生长状况。
2、使用本产品时应注意无菌操作，避免污染。
3、不宜长时间放置于室温环境或 2~8℃ 长期保存。
4、2～8℃ 中解冻，摇匀后使用，切忌反复冻融，用量较少时建议分装冻存，不可反复冻融。
下面来欣赏下用户实际的使用效果
BMDM诱导M2型巨噬细胞
华中科技大学同济医学院的老师
小红书账号：746699715
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