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【颗粒攻略】利用Multisizer 4e库尔特计数器检测藻类培养中的细菌污染

来源:贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司 更新时间:2026-03-19 13:30:34 阅读量:68
导读:【颗粒攻略】利用Multisizer 4e库尔特计数器检测藻类培养中的细菌污染




前言



在金藻纲(Chrysophyceae)中,既有仅需光能作为能量来源、以二氧化碳作为无机碳源进行生长的物种(自养生长),也有依赖有机碳源生长的物种(异养生长)。此外,已知部分物种能够同时利用无机碳源和有机碳源,这种营养策略被称为混合营养型。目前,人们对这些混合营养型生物会在何时利用何种代谢途径知之甚少,而这一选择可能取决于各自所处的环境条件。在利于不同营养行为的条件下开展生长实验,是理解混合营养型生长方式的必要基础。在此类实验中,总细胞计数为快速测定生长情况提供了一个可行指标


在液体培养的生长实验中,尽管采用无菌操作,培养液仍存在较高的细菌污染风险,因为所需的培养基中含有有机碳源。对于藻类而言,无菌培养物指的是无细菌的培养物;与之相对,含有细菌的培养物则被称为带菌培养物。检测细菌污染的常用方法包括固体培养基涂布法、荧光显微镜检测法或光学显微镜检测法。这些方法不仅在建立过程中需要耗费精力,还需在总细胞计数之外额外操作。借助贝克曼库尔特生命科学公司生产的Multisizer 4e库尔特计数器不仅能快速且可靠地测定总细胞数,还能根据颗粒的大小分布检测出藻类培养物中是否存在细菌污染


实验培养条件


混合营养型金藻奥杜藻(Ochromonas danica)与马尔汉棕鞭藻(Poterioochromonas malhamensis)于静置锥形瓶中培养,培养温度为20°C,光照强度为30 μmol光子·m?2·s?1。奥杜藻(O. danica)与马尔汉棕鞭藻(P. malhamensis)的培养采用含可溶性有机碳源的培养基(见图1)。


图1:含有机碳源培养基中奥杜藻液体培养物的不同生长阶段



总细胞数测定



所有待测细胞悬液均使用Multisizer库尔特计数器测定培养物的总细胞数。实验选用100 μm小孔管,因预期藻类细胞大小在3-15 μm之间,对应的细胞体积约为20-1000 μm3(见图2)。取50-500 μl细胞悬液,加入12 ml Isoton II电解液中。每个样品需对细胞悬液与Isoton II电解液的混合液取500 μl进行三次重复测量,将三次测量的平均值保存为“

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