人氧化三甲胺(TMAO)ELISA试剂盒

　　人氧化三甲胺(TMAO)ELISA试剂盒使用说明书

　　以下是‌人氧化三甲胺(TMAO)ELISA试剂盒‌的标准化操作流程及关键注意事项，综合整理自高可信度实验指南：

　　BS-9921人氧化三甲胺(TMAO)ELISA试剂盒

　　一、实验原理‌

　　采用‌双抗体夹心法‌：

　　包被抗体与样本中TMAO结合后，加入生物素化检测抗体形成复合物。

　　通过HRP标记的链霉亲和素催化TMB显色，颜色深度与TMAO浓度成正比。

　　二、试剂盒组分与储存‌

　　核心组分‌：

　　预包被微孔板、TMAO标准品、生物素化抗体、HRP酶结合物、TMB显色液、终止液(稀硫酸)。

　　储存条件‌：

　　未开封试剂盒2-8℃避光保存;显色液需严格避光。

　　有效期‌：通常为6个月(以标签为准)。

　　三、样本处理规范‌

　　血清/血浆‌：

　　采集后3000×g离心10分钟(血清)或30分钟(血浆)，避免溶血或脂血。

　　组织匀浆‌：

　　按1:9比例(重量/体积)用PBS匀浆，离心取上清。

　　保存要求‌：

　　短期(≤5天)可4℃保存，长期需-20℃分装，避免反复冻融。

　　四、操作步骤‌

　　试剂平衡‌：

　　所有组分室温平衡30分钟，浓缩洗涤液需37℃溶解结晶后1:20稀释。

　　加样与孵育‌：

　　每孔加100μl标准品/样本，37℃孵育90分钟→洗涤5次→加生物素化抗体100μl，37℃孵育60分钟。

　　显色与终止‌：

　　加入TMB避光显色15-30分钟，终止液终止后15分钟内测定450nm OD值。

　　五、关键注意事项‌

　　质量控制‌：

　　每批次需同步检测标准曲线(R²≥0.99)，样本OD值超出范围时需稀释复测。

　　安全防护‌：

　　终止液具腐蚀性，需佩戴手套、护目镜;TMB接触皮肤需立即冲洗。

　　操作细节‌：

　　加样需垂直孔底，避免气泡;洗板后彻底拍干;不同批次试剂禁止混用。

　　六、配套仪器与耗材‌

　　必需设备‌：

　　酶标仪(450nm)、精密移液器(0.5-1000μL)、37℃恒温箱。

　　推荐辅助‌：

　　自动洗板机(浸泡30秒提升精度)、水平振荡器(500±50 rpm)。

　　实验流程示意图及标准曲线计算方法可参考试剂盒英文说明书。若结果异常，需排查样本处理、温育时间或洗涤步骤。

　　注：以上资料仅供参考，如需更详细的操作图示或标准曲线绘制方法，可参考试剂盒附带的说明书或联系供应商获取技术支持。

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