蛋白质是人体必需的营养成分，大豆作为重要的植物蛋白来源，其蛋白质含量是衡量大豆品质的核心指标之一。我国相关标准对不同用途的大豆（如食品加工、饲料用）均有明确的蛋白质含量要求，准确测定大豆中的蛋白质含量对育种、收购、加工及质量控制具有重要意义。

本方案依据《GB 5009.5-2025 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》中第一法凯氏定氮法的全自动凯氏定氮仪法（5.2节），采用优云谱全自动凯氏定氮仪配合消化炉进行测定。
该方法将消解与检测流程无缝衔接：样品在消化炉中消化完全后，消化管直接转移至凯氏定氮仪，由仪器自动完成蒸馏、滴定及结果计算，具有自动化程度高、结果准确、重复性好的特点，适用于大豆及其他高蛋白食品中蛋白质的批量检测。

图 1 全自动凯氏定氮仪

仪器与试剂

1 仪器

• ? 优云谱全自动凯氏定氮仪（配有滴定系统、蒸馏系统）
• ? 消化炉（控温精度±1℃，最高温度≥420℃）
• ? 分析天平（感量0.001g）
• ? 配套消化管、移液管、量筒等玻璃器皿
• ? 粉碎机

图 2 全自动凯氏定氮仪及消化炉外观图

2 试剂

• ? 硫酸铜（CuSO?·5H?O）、硫酸钾（K?SO?）、硫酸（H?SO?，98%）
• ? 氢氧化钠（NaOH）、硼酸（H?BO?）
• ? 硫酸标准滴定溶液 [c(1/2H?SO?) = 0.1 mol/L]
• ? 甲基红指示剂（1 g/L）、溴甲酚绿指示剂（1 g/L）
• ? 混合指示剂B：1份甲基红乙醇溶液与5份溴甲酚绿乙醇溶液混匀
• ? 水：符合GB/T 6682规定的三级水

实验方法

1 试样制备

取代表性大豆样品，粉碎后过0.9 mm（20目）筛，混匀后密闭保存。

2 试样称量与消解

称取约0.2 g试样（精确至0.001 g），置于消化管中，依次加入硫酸铜0.4 g、硫酸钾6 g、硫酸15 mL。轻轻摇匀后置于消化炉中，于420℃恒温消解至少1小时，至消解液呈蓝绿色透明状。冷却后直接用于蒸馏滴定。同时进行空白试验。

图 3 消化炉消解过程图

3 蒸馏与滴定

启动全自动凯氏定氮仪并预热

检查碱液（氢氧化钠溶液）、吸收液（硼酸溶液与混合指示剂B的混合液）及滴定液（硫酸标准滴定溶液）是否已准备充足。

将装有消解液的消化管（包括试样和空白管）依次置于定氮仪样品盘上。根据仪器操作说明，设定蒸馏滴定参数，如加碱量、蒸馏时间、接收液体积等。

仪器将自动执行加碱蒸馏：

按消解用酸量的4倍加入氢氧化钠溶液进行碱化蒸馏，释放的氨被硼酸吸收后，以硫酸标准滴定溶液自动滴定至终点（混合指示剂B由蓝绿色变为浅灰红色）。

滴定完成后，仪器自动记录滴定体积并计算蛋白质含量，分别输出试样消耗体积 V? 和空白消耗体积 V?。

图 4 滴定参数设置界面及全自动凯氏定氮仪工作图片

结果与讨论

1 计算公式

蛋白质含量计算公式：

式中：

• ? X：蛋白质含量（g/100g）
• ? V?：试样滴定体积（mL）
• ? V?：空白滴定体积（mL）
• ? c：硫酸标准滴定溶液浓度（mol/L）
• ? m：试样质量（g）
• ? F：蛋白质折算系数（大豆取6.25）

2 测试结果

注：

• ? c = 0.1059 mol/L
• ? V? = 0.166 mL
• ? F = 6.25
• ? 结果保留三位有效数字。

图 5 检测结果截图

3 精密度

两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的5%，符合 GB 5009.5-2025 标准要求。

方案特点与优势

1 针对大豆样品的方法优势

• ? 样品粉碎过筛，确保消化均匀
• ? 高温消解彻底，氮释放完全
• ? 消解后直接上机，减少操作误差

2 仪器设备优势

• ? 消化炉加热均匀、耐腐蚀，可批量处理
• ? 全自动凯氏定氮仪实现自动化蒸馏、滴定、计算，数据可存储导出，支持智能化管理

3 关键操作要点

• ? 样品必须完全过20目筛
• ? 消解液呈蓝绿色透明状为终点
• ? 碱液添加量应为硫酸体积的4倍，确保强碱性
• ? 空白值应稳定且低于0.2 mL
• ? 滴定液需定期标定，确保浓度准确
• ? 折算系数 F = 6.25，适用于大豆及其制品

结论

本方案采用全自动凯氏定氮仪配合消化炉，建立了大豆中蛋白质含量的测定方法。方法严格遵循 GB 5009.5-2025 国家标准，操作简便、结果准确可靠，适用于大豆原料、豆制品及饲料等样品的批量检测，为育种、收购、加工及质量控制提供有力支持。

参考文献

[1] GB 5009.5-2025 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定[S].
[2] GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备[S].