大鼠蛋白激酶G-II型(PKG-II)ELISA试剂盒实验使用说明书

大鼠蛋白激酶G-II型(PKG-II)ELISA试剂盒实验使用说明书

产品规格：96T/48T

用途：用于科研实验。

保存条件及有效期：

1.试剂盒保存： 2-8℃。

2.有效期： 6个月

供货能力：现货，可根据客户需求批量订制生产。 公司经营的ELISA检测试剂盒种类齐全，

可以检测：人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。

均为现货，支持快递包邮，试剂盒提供免费代测服务

用途

该试剂盒用于体外定量检测血清、血浆或其他相关生物液体中浓度。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的抗原会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗体与结合在包被抗体上的抗原结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，抗原浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中指标的浓度。

样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现

沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

大鼠elisa检测试剂盒组成及保存

未拆封的试剂盒可在4℃保存一周;如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。

试剂盒组成 48孔配置 96孔配置

说明书 1份 1份

封板膜 2片 2片

密封袋 1个 1个

酶标包被板 1&;48 1&;96

标准品 0.3ml 6管 0.3ml;6管

酶标试剂 5 ml;1瓶 10 ml;1瓶

样品稀释液 3 ml;1瓶 6 ml×1瓶

显色剂A液 3 ml;1瓶 6 ml;1瓶

显色剂B液 3 ml;1瓶 6 ml;1瓶

终止液 3 ml;1瓶 6 ml;1瓶

20×浓缩洗涤液 15ml;1瓶 25ml;1瓶

试剂盒组成 48孔配置 96孔配置

说明书 1份 1份

封板膜 2片 2片

密封袋 1个 1个

说明：所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。

试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。

大鼠elisa检测试剂盒操作步骤

1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。

2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。

4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。

5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

试验所需自备物品

1. 酶标仪(450nm波长滤光片)

2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL

3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水

4. 吸水纸

试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15% 。