人L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒说明书

　　人L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒使用说明书

　　BS-0081人L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒

　　人L-Selectin/CD62L ELISA试剂盒

　　。

　　二、检测原理

　　采用夹心法ELISA技术：

　　包被抗体：预包被的L-Selectin多克隆抗体捕获样本中的目标蛋白。

　　生物素标记抗体：特异性结合捕获的L-Selectin。

　　ABC复合物：通过生物素-亲和素放大信号。

　　显色反应：TMB底物在过氧化物酶催化下显色，颜色深浅与L-Selectin浓度成正比。

　　三、操作步骤

　　1. 样本准备

　　血清/血浆：离心后取上清，避免溶血。

　　细胞培养上清/裂解液：离心去除颗粒，建议稀释后检测。

　　2. 标准品制备

　　冻干标准品用1mL样品稀释液复溶，梯度稀释(62.5-4000pg/mL)。

　　3. 加样与孵育

　　每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育2小时。

　　弃去液体，洗涤3次(每次200μL PBS)。

　　加入100μL生物素标记抗体(1:100稀释)，37℃孵育1小时。

　　洗涤后加入100μL ABC复合物(1:100稀释)，37℃避光孵育30分钟。

　　4. 显色与终止

　　每孔加入90μL TMB显色液，避光反应15-20分钟。

　　加入50μL终止液(黄色→蓝色)，立即检测。

　　5. 结果分析

　　酶标仪450nm读数，绘制标准曲线计算样本浓度。

　　四、注意事项

　　样本处理：避免反复冻融，血浆样本需使用EDTA抗凝。

　　试剂平衡：所有试剂使用前需恢复至室温(25℃)。

　　洗涤彻底：洗涤不充分会导致背景升高。

　　安全防护：TMB和终止液具腐蚀性，需戴手套操作。

　　五、性能参数

　　检测范围：62.5-4000pg/mL

　　灵敏度：<5pg/mL

　　特异性：与其他选择素无交叉反应。

　　六、常见问题

　　信号弱：可能因样本稀释过度或孵育时间不足，建议优化样本浓度或延长孵育。

　　高背景：可能因洗涤不彻底或试剂污染，需严格按步骤操作。

　　注：以上仅供参考，科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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