荧光显微镜的类型|用途

　　荧光显微镜是光学显微镜的一种，是免疫荧光细胞化学的基本工具。以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后观察物体的形状及其所在位置。用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。

荧光显微镜的发展

　　自从1590年詹森父子发明显微镜以来，已有400多年的历史。显微镜的发展一直是以提高图像的对比度和分辨力为主要目标。

　　荧光显微镜是以紫外光或蓝紫单色光激发标本来产生荧光，因为紫外光不可见，故由标本发出的荧光与背景反差很大，即荧光显微镜通常在黑暗的背景下观察彩色的图像;而普通显微镜是在明亮的背景下观察较暗的样品。这样荧光显微镜的对比度比普通显微镜提高约100倍，因此可观察到普通显微镜下看不到的结构细节。荧光显微镜具有对比度高这个突出的优点，得到了广泛的应用。

荧光显微镜的类型

　　透射式荧光显微镜：

　　下图(a)是透射式荧光显微镜的原理图。由汞灯发出的各种谱线的光线，经激发滤光片后只让某一种波长的紫外光线通过，如波长为404.7nm蓝紫光，经反光镜后，激发样品产生荧光。这个滤光片将其它波长的光线滤掉，并使样品激发荧光，所以称激发滤光片。

　　通常，荧光波长比激发样品的光的波长大得多，是可见光。这样产生的荧光和透过样品的一部分激发光(紫外光)，经物镜成像后，人眼即可用目镜观察荧光图像。为了防止紫外光进人目镜视场，降低图像材度和损伤人眼，安放了一块截止滤光片，它只让某一部分波长的谱线通过，如只让500～750nm的可见光通过，而不让500nm以下的光通过，所以称为截止滤光片。

　　反射式荧光显微镜：

　　上图(b)是反射式荧光显微镜的原理图。反射式荧光显微镜和透射式荧光显微镜的原理类同。

　　反射式荧光显微镜有下列优点：

　　①光能的利用率高。在反射式荧光显微镜中，激发光直接照射在标本的观察表面;而在透射式荧光显微镜中，激发光穿过具有一定厚度的标本后才抵达观察表面，能量被衰减。

　　②反射式荧光显微镜可以观察不透明标本。所以现在大多采用反射式荧光显微镜。然而，实现反射荧光的技术难度较高，此技术随着电子计算机的出现，薄膜技术的不断发展才得以实现。实际反射式荧光显微镜中，激发、截止滤光片和半透分光镜是做成一个滤光片组。

荧光显微镜和普通显微镜的区别

　　荧光显微镜是通过使被测物体发出荧光，再通过观察荧光的波长来对物体进行研究的工具。虽然都是属于显微镜的范畴，但是荧光显微镜从制造原理到观察方法都要和普通的显微镜不同。

　　1、应用领域

　　普通显微镜可以观察多种不同领域里的产品，但是荧光显微镜就只能用于观察生物细胞。它使用紫外线照射被测物质，使其发出荧光，然后再对物质进行仔细的观察和分析。

　　如果目标无法发出荧光我们还可以用荧光燃料进行染色，然后再进行观察。使用荧光的方法多是为了观测一些特别细小的物质，这些物质通常不能被肉眼直接观察。生物科学里经常需要进行观察的细胞类物质很难用肉眼观察，所以荧光显微镜在生物细胞学中的应用就会比较多。

　　2、紫外线观测

　　普通显微镜利用自然光源进行观察，而荧光显微镜是通过紫外线进行观测。紫外线的波长较短，所以在做为观察物体的光源时，可以得到比较高的分辨率。对于观察细胞内部的细胞壁和细胞核等具体结构会有所帮助。

　　3、两个滤光片

　　荧光显微镜有两个滤光片，一个主要用来在使用前过滤可见光，减少观测时的误差。另外一个在物镜和目镜之间的滤镜是为了过滤紫外线，用来保护研究人员的双眼。紫外线毕竟是对人体有所损害的，不进行紫外线的防护的话，会对眼睛造成严重的伤害。因为其它的显微镜无需对紫外线进行防护，所以也不需要安装这两个过滤片。