PCR的反应动力、循环参数及临床应用
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的Zda特点，是能将微量的DNA大幅增加。
PCR的反应动力学
DNA扩增量随着PCR的三个反应步骤的重复循环进行而呈指数级增长。实际反应初期，靶序列DNA片段呈指数级增加，当PCR产物的逐渐积累时，被扩增的DNA片段不再呈指数增加，此时进入线性增长期或静止期，使得平均效率达不到理论值。
循环参数
预变性
PCR能否成功至关重要的因素为模板DNA是否完全变性与PCR酶是否完全激活。建议参考试剂说明书来决定加热时间，通常未修饰的Taq酶激活时间为2min。
变性步骤
通常温度为95℃，使各种靶DNA序列完全变性所需的时间大概为半分钟，可能的情况下可以缩短该步骤时间。若变性时间过长，会对酶活性损害，若变性时间过短，则靶序列变性不彻底，可能导致扩增失败。
引物退火
需要从多方面来决定退火温度，通常是以引物的Tm值为参考，按照扩增的长度对退火温度进行适当的下调。之后在此次实验基础上做出预估。PCR的特异性受到退火温度的影响非常大。
引物延伸
引物延伸通常在72℃（Taq酶Z适温度）下进行。若退火温度较高并且扩增长度较短，那么可以省去本步骤。
扩增片段长短决定了延伸时间，通常推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。
循环数
大多数PCR包括25-35循环，若过多容易有非特异扩增产生。
Z后延伸
在Z后一个循环后，反应在72℃维持10-30分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。
临床应用
移植配型：
伴随着PCR技术的出现，HLA配型领域也引入了分子生物学技术，通过PCR扩增仪能够使得HLA基因分型方法快速、准确的建立，使临床移植配型得到满足。
诊断恶性肿瘤：
PCR技术不仅带来了简便快速、准确的临床诊断方法，而且提供了肿瘤相关疾病的ZL与预后的监控手段。其被用来检测肿瘤相关病毒基因以及癌基因和抑癌基因缺失与点突变。
诊断遗传性疾病：
遗传性疾病是以核酸的表达产物和核酸分子结构变异为发病基础的。对于这一类疾病，PCR技术正好是有效的检测手段。
诊断感染性疾病：
在感染性疾病的诊断方面，对于一些没有可靠和稳定的检测手段以及需要很长周期培养的病原体，PCR技术特别适合使用。
全部评论(0条)
推荐阅读
-
- PCR的反应动力、循环参数及临床应用
- 聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。
-
- PCR的反应特点
- PCR技术是模拟体内DNA的天然复制过程，在体外扩增DNA分子的一种分子生物学技术，主要用于扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。
-
- PCR的反应流程
- PCR是聚合酶链式反应的简称，是一种酶促化学反应，可以在试管里将待测的目的基因在很短的时间内扩增五十万倍乃至上百万倍，大大提高了基因诊断的灵敏度，降低了分析的难度。
-
- PCR反应五要素
- 对特定的DNA片段起到放大扩增作用的一种分子生物学技术，被称为聚合酶链式反应。其可以被当作生物体外的特殊DNA复制，能够大幅增加微量的DNA
-
- 电泳仪的临床应用
- 带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。
-
- 冷热循环湿热试验箱参数
- 无论是电子产品、汽车零部件，还是航空航天器材，这种设备能够复制出极端环境，帮助测试和评估产品的耐久性与可靠性。本文将详细介绍冷热循环湿热试验箱的参数设置与应用特点，关注其在温湿度控制、循环测试等方面的技术指标，并为选择适合设备的用户提供专业指导。
-
- 相差显微镜临床应用
- 它通过增加样本中不同部分的相位差，从而实现高对比度的成像，使得细胞结构、组织组织以及微小病变得以清晰呈现。本文将详细探讨相差显微镜在临床应用中的重要性、技术原理及其在医学诊断中的具体应用，尤其是在细胞学、病理学和生物医学研究中的关键作用。
-
- 基因扩增仪的基本要素、反应条件及反应步骤
- 简而言之，PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成，大体上，其是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。如今常用的技术，能够把一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。
-
- 核酸芯片检测仪临床应用
- 这种检测仪通过对患者体内的核酸进行高效的检测，为疾病的早期诊断、方案的选择及预后评估提供了可靠依据。本文将深入探讨核酸芯片检测仪在临床中的应用，尤其是在传染病、癌症筛查和基因组学研究中的重要作用。
-
- 免疫印迹法临床应用
- 免疫印迹法是往膜上转移蛋白质，然后利用抗体进行检测。可通过融合部分的抗体对新基因的表达产物进行检测，可用相应抗体作为一抗对已知表达蛋白进行检测。其有很强的特异性，很高的敏感度，以及很大的分析容量。
-
- 角膜共聚焦显微镜临床应用
- 通过其独特的光学原理，能够在非侵入性的前提下实时观察角膜细胞的微观结构和功能状态，提供了比传统显微镜更为的诊断依据。本文将探讨角膜共聚焦显微镜在临床中的应用价值，涵盖其在角膜疾病诊断、治果评估以及术后跟踪中的多种应用，帮助提升角膜疾病的早期诊断率和治果。
-
- PCR反应所需要的时间的影响因素
- 模块升温和降温时间、模块与PCR管内温度平衡时间、延伸时间以及循环次数这四个因素决定了在PCR仪上完成一个PCR反应所需要的时间。
-
- 荧光定量PCR的应用
- 实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性高和精确性高的优点，此项技术已被应用于分子生物学、医学、食品检测和环境监测等多个领域。
-
- PCR仪的控温方法及应用
- 聚合酶链式反应是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，通过高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应形成一个周期，目的DNA迅速扩增，其具有节约时间，操作简单，高灵敏度，强特异性等特点。
-
- PCR常见问题及常见故障
- 简单的说，PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术，可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。
-
- PCR的设想与实现、步骤以及反应物质
- pcr仪器的发展pcr温度循环至关重要，pcr扩增仪各参数必须准确。自第一台pcr扩增仪问世以来，在短短的几年间，扩增仪经过几代的发展，不断采用新技术，并且进一步朝高智能化和自动化的方向发展。
-
- 荧光定量pcr仪 参数
- 随着技术的不断进步，荧光定量PCR仪已经成为生命科学研究中不可或缺的工具。而在选择合适的荧光定量PCR仪时，了解其参数显得尤为重要。本文将详细介绍荧光定量PCR仪的关键参数，并帮助科研工作者根据实验需求选择合适的设备。
-
- 微波萃取特点和临床应用
- 微波萃取又被叫做微波辅助提取，指的是在微波反应器中采用适当的溶剂将各种化学成分从植物 、矿物 、动物组织等中提取出来的技术和方法。频率在300兆赫-300吉赫的范围内的电磁波，即为微波。
-
- 基因扩增仪的的分类及PCR的创建
- 按照DNA扩增时升温介质的差异，PCR仪可以被分为变温式流式PCR仪、水浴式PCR仪以及变温铝块式PCR仪。
-
- 临床质谱仪中磁珠应用
- 磁珠技术作为一种高效、精确的分离和富集技术，已经在质谱分析中得到广泛应用。通过结合磁珠与质谱技术，能够大幅提升临床诊断的准确性和灵敏度。本文将探讨磁珠在临床质谱仪中的应用，特别是在样本处理、分离富集以及靶向分析中的重要作用。
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布，观点仅代表作者本人，不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们立即通知作者，并马上删除。
②凡本网注明"来源：仪器网"的所有作品，版权均属于仪器网，转载时须经本网同意，并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱：hezou_yiqi
沪公网安备 31011502008050号
参与评论
登录后参与评论