山东市监局发布《疫病净化技术规范 荧光RT-PCR检测法》

      本标准规定了种猪场猪瘟净化的检测方法与判定标准、净化群的建立、净化群的维持和综合生物安全措施。

      耗材：1、离心管;2、PCR薄壁管;3、酶标板，移液器吸头。

　　检测仪器：

　　1、荧光PCR检测仪;              2、PCR仪和凝胶成像系统;

　　3、高速台式冷冻离心机;       4、组织研磨器或者研钵。

　　5、微量移液器；    6、酶标仪；     ;7、恒温箱;    8、高压灭菌锅。

　　试剂

　　1、无水乙醇，-20 ℃预冷。

　　2、75 %乙醇，无水乙醇和双蒸水配制，-20 ℃预冷。

　　3、dNTPs：含dATP、dGTP、dCTP、dTTP各10 mmol/L，-20 ℃保存，避免反复冻融。

　　4、普通PCR引物参照GB/T 16551。

　　5、荧光PCR引物和探针参照GB/T 27540。

　　6、酶标检测试剂 等效采用GB/T 34729商品化试剂盒。

　　采样准备：

　　扁桃体采样器、灭菌0.5 mL离心管、灭菌棉签或牙签、3 % NaOH溶液、手电筒、记号笔、采样记录表等。

　　采样器械应用3 % NaOH 溶液消毒处理，并用水清洗干净后再采下一份，防止交叉感染。

　　抗体检测：

　　依据GB/T 34729执行。按照等效商品化试剂盒说明书操作并判定结果。优先使用猪瘟病毒抗体阻断ELISA试剂盒检测猪瘟抗体。

　　日常监测：

　　每年对净化猪群进行2次抽检。每次采集扁桃体和血清样品，抽样比例参考表A.1。置信度95 %，预期流行率3 %。检测方法按及执行。