小鼠磷酯酶Cγ链(PLCγ1)ELISA试剂盒实验使用说明书
BS-9274 小鼠磷酯酶Cγ链(PLCγ1)ELISA试剂盒
一、产品概述
检测原理
采用双抗体夹心法,通过预包被抗小鼠PLCγ1抗体的微孔板捕获样本中的目标蛋白,再与HRP标记的检测抗体结合,形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。经TMB显色后,450nm波长下测定吸光度(OD值),浓度与OD值呈正相关。
性能指标
灵敏度:<0.156 ng/mL
检测范围:0.156-10 ng/mL
重复性:板内/板间变异系数<10%
二、试剂盒组成
组分规格(96T)存储条件
预包被酶标板8×12条2-8℃(避光)
标准品6管(0.156-10 ng/mL)-20℃(避免反复冻融)
检测抗体-HRP10 mL4℃
20×洗涤缓冲液25 mL室温
TMB显色液(A/B)各6 mL4℃(避光)
终止液6 mL室温
三、实验步骤
样本准备
血清/血浆:使用EDTA抗凝管采集,避免溶血,2-8℃保存48小时或-80℃长期保存。
组织匀浆:按1:9比例加入裂解缓冲液,冰上匀浆后离心取上清。
标准品稀释
取7支EP管,标注1/2至1/64梯度,按倍比稀释法配制标准曲线(示例:200μL标准品+200μL稀释液混匀后转移至下一管) 。
检测流程
加样:每孔加入100μL标准品/样本,37℃孵育90分钟。
洗涤:弃去液体,每孔加入350μL 1×洗涤液,静置30秒后拍干,重复3次。
显色:加入100μL TMB底物,避光孵育15分钟,加入50μL终止液。
测定:30分钟内用酶标仪读取450nm OD值。
四、注意事项
试剂平衡:使用前需将试剂盒室温平衡60分钟,避免冷凝水影响结果。
移液精度:使用校准后的移液器,避免交叉污染。
数据异常处理:若标准曲线R²<0.99,需检查稀释准确性或更换批次试剂。
五、结果计算
以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标绘制四参数拟合曲线。
样本浓度通过曲线方程计算,若超出检测范围需重新稀释。
六、常见问题
高背景:可能因洗涤不彻底或底物污染,需检查洗涤步骤及试剂有效期。
复孔差异大:确保加样速度一致,样本充分混匀。
注意:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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