精准守护，全面应对 | 婴配粉中蜡样芽孢杆菌呕吐毒素的检测方案

近期，由于原料疑似遭到蜡样芽孢杆菌呕吐毒素的污染，某知名品牌在全球范围针对旗下多批次婴儿配方乳粉开展召回。蜡样芽孢杆菌可以产生腹泻性肠毒素和呕吐毒素——肠毒素不耐热，可通过高温处理灭活；呕吐毒素耐热性强，无法通过常规冲调或煮沸灭活。婴幼儿由于免疫系统未发育完全，摄入此类毒素后，易导致恶心、呕吐、胃痉挛等一系列症状，严重时可引起脱水或电解质紊乱。

针对婴儿配方食品及其原料在生产储运过程中，可能产生的蜡样芽孢杆菌污染风险，市场监管总局于去年3月已发布《婴幼儿配方乳粉生产企业蜡样芽胞杆菌风险防控指南》^[1]。常规方法一般采用平板菌落计数法，操作较为繁琐，且耗时较长。采用菌落测试片可以一定程度上简化流程，提升效率（Compact Dry BC蜡样芽胞杆菌测试片，点击划线文字即可查看方案)。对比微生物培养法，LC-MS/MS方法的灵敏度和准确性更高，且不局限于活菌，能够更精准更快速地锁定毒素污染的风险。

SGLC可提供针对食品中蜡样芽孢杆菌呕吐毒素的完整检测方案，参照中国卫生监督协会团体标准T/WSJD 57-2024 方法并进行优化——采用SHIMSEN Styra HLB对样品进行净化，Shim-pack Scepter C18-300 色谱柱进行分离，岛津串联质谱 LCMS-8060NX 检测分析。对婴儿配方奶粉空白样品加标后（添加浓度：0.5 μg/kg），平行 3 份样品考察回收率和 RSD。结果显示，蜡样芽孢杆菌呕吐毒素的加标回收率为101.2%，RSD为 2.77%，回收率高，重现性好，满足风险监测的需求。

1. 实验部分

Shimadzu LC-40B X3 与 LCMS-8060NX 联用系统；

色谱柱： Shim-pack Scepter C18-300（1.9 μm，2.1×100 mm；P/N：227-31203-05）；

纯水机： PR-FP-0120α-MT1（+ 60L 水箱 + 取水器）；

固相萃取小柱： SHIMSEN Styra HLB（200 mg/6 mL；P/N：380-00855-10）；

SHIMSEN Disc HPTFE 针式过滤器（P/N：380-00341）；

LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

Nichipet Air 移液枪： Nichipet Air 0.5-10 μL（P/N：00-NAR-10）；

Nichipet Air 10-100 μL（P/N：00-NAR-100）；

Nichipet Air 100-1000 μL（P/N：00-NAR-1000）；

Nichipet Air 1000-10000 μL（P/N：00-NAR-10000）。

色谱柱：Shim-pack Scepter C18-300（1.9 μm，2.1×100 mm；P/N：227-31203-05）

流速：0.35 mL/min；

进样量：5 μL

柱温：40 ℃

流动相：A：0.1%甲酸-2 mmol 乙酸铵水溶液    B：0.1 %甲酸乙腈溶液

梯度洗脱程序如下：

离子化模式： ESI， 正离子扫描；

扫描模式：多反应监测（MRM）
碰撞气：氩气

加热气：干燥空气 10 L/min
雾化气：氮气(3 L/min)

干燥气：氮气 10 L/min
接口温度：400℃

DL 温度：250 ℃

加热模块温度：400 ℃

MRM参数如下：

称取 1g（精确至0.01g）均质后的试样于 10mL 离心管，加入蜡样芽胞杆菌呕吐毒素内标工作液（0.1mg/L）20μL，静置30min 后，加入5 mL乙腈，涡旋振荡30s，超声混匀30min，4℃下12000r/min离心10min。转移全部上清液至15mL离心管中，加入5.0mL水，涡旋混合30s，待净化。

SHIMSEN Styra HLB（200 mg/6 mL）

HLB 柱经3.0 mL甲醇，3.0mL纯水依次活化，取全部样品提取液上样，待上样液完全过柱后，以3.0mL纯水和3.0mL 80%甲醇水依次淋洗小柱， 吹干小柱后，用5.0mL乙腈：甲醇溶液（9:1，V:V）洗脱，收集全部洗脱液，氮气浓缩至近干，残渣用1.0mL乙腈复溶，过微孔滤膜供上机测定。

2. 实验结果及讨论

对婴儿配方奶粉空白样品加标后（添加浓度：0.5 μg/kg）， 按照上述前处理方法处理后上机，平行 3 份样品考察回收率和RSD，结果显示， 蜡样芽孢杆菌呕吐毒素加标回收率为101.2%，RSD为2.77%，回收率高，重现性好。 回收率及RSD数据见下表：

岛津耗材产品及方案下载