靶向 DAP5：精准调控肿瘤微环境免疫平衡，增强抗肿瘤免疫应答的新策略

调节性 T 细胞（Treg）可在恶劣的肿瘤微环境（TME）中存活增殖，从而抑制抗肿瘤免疫应答。肿瘤微环境中的慢性应激会抑制经典的帽依赖型翻译（CDT），该过程会损伤效应 T 细胞的功能，却不会影响调节性 T 细胞的存活。死亡相关蛋白 5（DAP5 / 真核翻译起始因子 4G2）作为一种非经典的翻译支架蛋白，已有研究表明其可在体外促进人调节性 T 细胞的分化，但其在胸腺来源调节性 T 细胞的发育、外周调节性 T 细胞的稳态维持，以及肿瘤浸润性调节性 T 细胞（ti-Treg）存活能力调控中的作用仍不明确。

上海交通大学医学院附属上海市第一人民医院团队在Advanced Science发表题为” Targeting DAP5 Disrupts Alternate Mode of Translational Initiation in Tregs and Potentiates Antitumor Immunity”文章。

本研究发现，在结直肠癌患者和小鼠皮下肿瘤模型中，DAP5 的表达水平均与肿瘤浸润性调节性 T 细胞的数量呈正相关。调节性 T 细胞中 Dap5 基因纯合敲除的小鼠，其胸腺和外周调节性 T 细胞的发育过程未受影响，却会自发出现典型的皮肤鳞屑样病变。调节性 T 细胞中 Dap5 基因的单倍剂量不足，可在维持机体外周免疫稳态的同时抑制肿瘤生长，且该过程中肿瘤组织内 CD8+T 细胞的浸润程度和效应功能均得到增强。机制研究表明，Dap5 可介导调节性 T 细胞中编码 CD25 和 MCL-1 的转录本发生替代性翻译，进而在应激性的肿瘤微环境中维持调节性 T 细胞的谱系稳定性与存活能力。

综上，调节性 T 细胞依赖 DAP5 介导的替代性翻译，维持自身的外周稳态及在肿瘤微环境中获得性的存活增殖能力。选择性阻断该通路可损伤肿瘤浸润性调节性 T 细胞的功能，同时不会破坏机体的全身免疫耐受，为增强抗肿瘤免疫应答提供了一种潜在的治疗策略。

实验部分

1. 样本成像与信号捕获

研究中对结直肠癌（CRC）患者的癌组织及癌旁组织样本进行了固定液固定石蜡包埋（FFPE）处理，并制作成组织芯片进行多色免疫荧光染色，目标标志物包括 CD3、CD19、CD4、FOXP3（Treg 特异性标志物）和 DAP5。TissueFAXS Spectra 系统，对染色后的组织切片进行全景扫描，精确捕获不同标志物的荧光信号，确保细胞及分子定位的准确性。

2. 关键分子表达的定量分析

通过扫描成像后的数据处理，研究实现了对肿瘤浸润性 Treg（ti-Treg）中 DAP5 表达水平的定量评估：

l 计算 DAP5 的平均荧光强度（MFI），对比癌组织中 ti-Treg 与癌旁组织中 Treg 的 DAP5 表达差异，发现 ti-Treg 中 DAP5 表达显著升高；

l 结合 FOXP3 阳性细胞的定位，明确 DAP5 高表达与 ti-Treg 在肿瘤微环境（TME）中的富集存在正相关（cor=0.263, p=0.034），为 “DAP5 与 ti-Treg 丰度相关” 这一核心结论提供了直接的临床样本证据。

3. 免疫微环境结构的可视化验证

在验证 Dap5 敲除小鼠的免疫紊乱表型时，研究通过对脾组织组织进行 mIF 染色（CD3 标记 T 细胞、CD19 标记 B 细胞），利用 Tissue Cytometry技术观察到荷瘤小鼠脾组织中生发中心（GC）结构受损、B 细胞数量减少，直观佐证了 Dap5 缺失对体液免疫的影响，补充了流式细胞术和分子生物学检测的结果。

Figure 1 肿瘤浸润性调节性 T 细胞中 DAP5 的高表达与肿瘤浸润性调节性 T 细胞的浸润程度相关

Figure 3 HO-Dap5ΔFoxp3表现出致死性自身免疫耐受缺陷