组胺是具有生物活性的低分子含氮有机碱,广泛存在于水产品、肉制品、发酵食品等各类食品中。它主要通过食品原料内源性氨基化作用,以及加工贮藏中腐败微生物酶解组氨酸的外源性途径合成,其含量与原料种类、环境 pH、食盐浓度、储存温度等因素密切相关。这些因素既是组胺生成的影响条件,也是生产卫生的衡量指标,而组胺含量本身还能反映食品新鲜度,过高则可能意味着食品变质、存在安全隐患,因此监测和控制食品中组胺水平对保障食品安全与质量至关重要。
运用表面增强拉曼光谱技术,以银纳米颗粒作为SERS增强基底,建立SERS检测形式的优化方案,实现对组胺样品拉曼信号的稳定增强以用于组胺含量的检测。
01
检测方案
使用如海光电产品RMS3000,搭建显微拉曼光谱系统,测试场景如下:
02
实验方法
1.拉曼光谱采集
通过对鱼肉、虾肉、葡萄酒样本进行处理,获得组胺提取液。为验证AgNPs作为拉曼增强基底的稳定性和灵敏性,以4-MBA(1 mmol/L)为拉曼信号分子与AgNPs混合,进行拉曼测试。
以4-MBA作为拉曼信号分子、AgNPs作为SERS增强基底的检测结果如图1所示。经AgNPs增强后的拉曼特征峰强度显著提高,拉曼增强因子约为10.39×10,表明所制备的AgNPs具有出色的拉曼增强作用,能够有效提高检测信号的灵敏度。
图1 AgNPs增强后组胺的SERS图(B)
2. 组胺标准样品测定
为评估所建立方法对组胺的检测性能,在体系中加入不同含量的组胺(10、50、100、400、600、800、1 000 mg/kg)进行验证。
图2 加入不同含量组胺后的SERS光谱(A)以及1257 cm-1处SRES信号强度
如图2所示,随着组胺含量的增加,体系的拉曼信号呈现出明显的浓度依赖性增强。这可以归因于随着组胺含量的增加,促使更多的组胺分子通过咪唑环氮原子与AgNPs表面形成配位键,提高组胺分子的覆盖密度;同时,高浓度的组胺作为分子桥梁诱导AgNPs发生可控聚集,形成更多纳米间隙结构,使体系的电磁场增强效应显著提升,检测灵敏度提高。通过分析1 257 cm?1 处拉曼特征峰的强度变化,发现拉曼信号强度(Y)与组胺含量(X)呈现出良好的线性关系,通过拟合得到回归方程Y=10.87X+2 596.06 (R2=0.974 2)(图1B)。
3. 实际样品检测
为了进一步评估本方法的实际应用能力,选取了 3 种典型食品基质(鱼类、甲壳类和发酵饮品)进行加 标回收实验。如图3所示,在100、200 mg/kg和300 mg/kg 加标水平下,鱼肉、虾肉和葡萄酒样品均显示出清晰的组胺特征峰。
图3 鱼肉(A)、虾肉(B)和葡萄酒(C)样品加标回收实验的SERS图
表1所示,3 种基质的回收率在 95.95%~106.26%,RSD为1.6%~5.9%。检测结果与高效液相色谱法的测定结果接近。表明本方法能满足不同食品基质中组胺的快速检测需求,可为食品安全现场检测提供新方案。
表1 实际样品中组胺的检测方法与对应结果
采用如海光电产品RMS3000,搭建显微拉曼光谱系统能够有效测得sers效应下不同样品中的组胺含量。
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