权威文章！Intabio ZT-ZenoTOF 7600联用系统解锁ADC电荷异构体分析

抗体偶联药物（ADC）因其“精准打击”的治疗优势，已成为当前生物药研发的热点方向。然而，ADC结构高度复杂，其电荷异构体（Charge Variants）来源多样，直接关系到药物的安全性、有效性和批间一致性，也是监管关注的关键质量属性（CQA）。

Intabio ZT系统串联

ZenoTOF 7600系统介绍

毛细管等电聚焦、毛细管区带电泳是进行生物制品的电荷异质性分析的主要方式，这两种分离模式早已在PA800 Plus药物分析系统上通过的国际多企业联合验证。但上述方法仅能提供等电点定性或各电荷异构体定量的信息，无法实现对每个电荷异构体的鉴定，解释其形成的原因。

图1. Intabio ZT系统串联ZenoTOF 7600系统

Intabio ZT系统串联ZenoTOF 7600系统（如图1）将成像毛细管等电聚焦（iCIEF）与高分辨质谱（MS）实现在线联用，该技术可以获得如下产品信息：

这一流程打通了传统iCIEF“只能看峰、不能知因”的瓶颈，使每一个电荷异构体的峰都能被直接“看清身份”。

Intabio ZT系统串联ZenoTOF 7600系统

对ADC电荷异构体的分析

图2. iCIEF-MS联用技术的原理示意图及典型图谱

（iCIEF-UV-Focus，iCIEF-UV-mobilization、iCIEF-MS-BPC）

文中以ADC样品为例，通过iCIEF的聚焦、迁移及质谱的检测（如图2），在一针分析中获得了更全面的关键质量属性。iCIEF-UV的结果中共检测到6个电荷异构体，其中包含3个酸性异构体、2个碱性异构体。不同的电荷异构体在质谱检测中均可对应实现质量分析。

图3. iCIEF-MS的数据分析（可直观检测pI及分子量分布情况）

从质谱的热图解析中，不仅可以明确不同电荷异构体的分子量变化，也可以明显发现有些电荷异构体中的成分并不单一。比如主峰中包含了DAR2的不同N糖修饰，如G0F/G0F，G0F/G1F等，甚至还包含单条链的G0F，而主峰到碱性峰1（B1）的变化包含了+k和+ProAM，主峰到酸性峰1（A1）的变化包含了DAR2的+2 NeuAC，还有DAR3的G0F/G0F。

结果从“完整分子（Top-down）”视角解析电荷异构体来源，并从质谱的分析量解析中检测到多种修饰类型，除了典型的N糖，还包括唾液酸修饰、脯氨酸酰胺化、C末端赖氨酸丢失等，也可以明确ADC小分子的含量对于电荷异构体的影响，从该数据可以发现小分子数量越多，电荷异构体的pI就越低。该数据充分解释了不同电荷异构体之间细微差异的由来，研究者能够快速判断某一电荷峰是“DAR驱动”，还是“PTM驱动”，为后续深入机制研究指明方向。

Intabio ZT系统串联

ZenoTOF 7600系统的核心亮点

iCIEF-MS对难以收集、含量极低的酸/碱电荷异构体实现在线检测，且搭配质谱的Zeno Trap功能显著提升灵敏度，含量仅为千分之几的异构体也可以被准确测定分子量，获得的信息更丰富，提高研究人员的效率。