蜂蜜中四环素类药物残留检测的固相萃取方法（Copure® HLB）

一、样品提取 

称取混匀蜂蜜试样 5.00 g( 精确到 0.01 g)，置于 50 mL 离心 管中，用 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 缓冲液溶解并定容至 50  mL，涡旋混合 1 min，冰水浴超声 10 min，转移至 50 mL 离心 管中，冷却至 0℃ -4℃，5000 r/min 离心 10 min( 温度低于 15℃ )，用滤纸过滤待净化。 

二、SPE 柱净化（Copure® HLB，60 mg/3 mL） 

活化：HLB 柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。 

上样和洗脱：准确吸取 10 mL 备用液以 1 滴 / 秒的速度过 HLB 固相萃取柱，待样液全部流出后，依次用 5 mL 水和 5 mL 甲醇 - 水 (5:95, v/v) 淋洗，弃去全部流出液。2.0 kPa 以 下减压抽干 5 min，Z后用 10 mL 甲醇 - 乙酸乙酯溶液 (1:9,  v/v) 洗脱，收集洗脱液。

重新溶解：洗脱液于 40℃氮气吹干，加 10 mmol/L 三氟乙酸 水溶液 1.0 mL 溶解残余物，水系滤膜过滤，供高效液相色谱 测定。 

三、仪器条件 

设备：Waters Alliance 2695 色谱柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器：Waters 2487 紫外检测器 检测波长：350 nm 流动相：A：乙腈   B：10 mmol/L 三氟乙酸水溶液 洗脱方式：梯度洗脱，见表 1 

表 1 流动相梯度洗脱程序