牛奶中氟苯尼考检测的固相萃取方法（Copure® HLB）

一、样品提取 

准确称取牛奶 2.00 g（精确到 0.01 g），加入乙酸乙酯 15 mL，高速均质 1 min，加入 5 g 无水硫酸钠，涡旋振荡 1  min，摇床振荡 10 min。4000 r/min 转速离心 5 min。将上清 液转移至梨形瓶中，于 45℃旋蒸至近干，用 6 mL 水溶解残渣， 2×5 mL 次正己烷除脂，弃去正己烷层，取 3 mL 水层待净化。 

二、SPE 柱净化（Copure® HLB，60 mg/3 mL） 

活化：HLB 固相萃取柱使用前依次使用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。 

上样和洗脱：将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中，以 2 mL/min 的流速过柱，弃去滤液，用 5 mL 水淋洗固相萃取柱， 弃去淋洗液，抽干 5 min。用 5 mL 5%氨化甲醇洗脱固相萃取柱， 收集洗脱液。

重新溶解：洗脱液于 45℃氮吹吹干，用 1 mL 甲醇定容，0.22  µm 微孔滤膜过滤，供 HPLC 上机测试。 

三、仪器条件 

设备：Waters Alliance 2695 色谱柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器：Waters 2487 紫外检测器 检测波长：224 nm  流动相：A：水   B：乙腈 洗脱方式：等度洗脱，A: B=83: 17 流速：1.0 mL/min  进样体积：20 µL

四、实验结果 

表 2 添加水平为 5.0 mg/kg 牛奶中氟苯尼考的添加回收结果