猪肉中激素检测的固相萃取方法（Copure® HLB）

一、样品提取 

准确称取均质后的猪肉 5.0 g 于 50 mL 离心管中加入水 20 mL， 甲醇 5 mL，涡旋 1 min，4500 r/min离心 5 min，取上清液，备用。 

二、SPE 柱净化（Copure® HLB，60 mg/3 mL） 

活化：HLB 固相萃取柱使用前用 3 mL 甲醇、3 mL 水活化。 上样和洗脱：往固相萃取柱中加入提取备用液，弃去流出液； 加入 3 mL 35% 甲醇水溶液淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱；加 6 mL 甲醇洗脱，收集洗脱液（整个上样、洗脱过程保持流速 1  mL/min）。 

重新溶解：40℃缓慢氮气流条件下吹至近干，用 1 mL 甲醇 溶解，经 0.22 µm 滤膜重新过滤，供 HPLC 测定。 

三、仪器条件 

设备：Waters Alliance 2695 色谱柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器：Waters 2487 紫外检测器；  检测波长：230 nm  流动相：A：乙腈   B：水；  洗脱方式：梯度洗脱 

表 1 梯度洗脱条件