【柏恒科技小课堂】PCR反应程序优化之疾

图1

首先，仪器运行设置选择快速模式+模块控温的组合将反应时长进行极致压缩。其次，在总时长不变的前提下合理分配循环段变性与退火延伸的时长。最后，在其次筛选出可用反应程序的基础上进行微调，再一次缩短反应段的时长或在总时长允许的条件下适当延长反应段的时长以达到最优的反应效果。

因为快速试剂所用的扩增酶相较于普通试剂的酶来说有着更为快速的延伸速度，所以在设置退火延伸段反应时长时可以进行大幅度的压缩。在压缩变性反应时长时须注意，因为选用的是模块控温，如果变性时长过短会造成试剂的实际温度不足95℃或95℃维持时长不够而造成模板的解双链不充分进而影响信号的积累，所以变性反应段的时长不宜过度极端。

柏恒Q9600系列可提供最快8℃/sec的升降温速率，且具备等温差梯度功能（如图4），满足常规试剂开发、检测的同时也为快速试剂提供了一个很好的反应平台。