【技术讲解】如何提高微量DNA BS转化的转化率？

但在微量DNA样本（≤10 ng，涵盖游离DNA、微量组织样本、单细胞裂解液、FFPE微量降解DNA等）处理场景中，转化率和回收率会大打折扣，今天在这里总结了一些实操经验，以帮助大家解决微量样本转化的问题。

先来看一组测试数据

不同样本投入量的BS转化结果，低于10 ng input，转化率无法稳定达到99%以上，而高于10 ng input转化率能稳定达到99.5%以上。

 1?? 分子反应效率低下，转化不完全风险陡增；

 2?? 样本非特异性吸附损耗，有效模板量锐减；

 3?? 纯化回收环节阻滞，样本回收率大幅偏低。

在这一篇文章中提到单细胞RRBS 在BS转化后添加tRNA进入下一步纯化过程。能提高微量样本的转化率和回收率。

那什么是tRNA，什么时候使用？添加多少合适？对后续WGBS是否有影响？

首先来了解一下什么是carreierRNA

再来看一组实战经验数据

结果显示：低投入量样本，添加100ng/500ng carrier RNA能提高转化效率，并且不影响unique map Ratio。因此，建议低于10ng的样本投入量，在样本进行转化之前加入100 ng carrier RNA（19701ES）。此外，在洗脱时，预热洗脱液能提高DNA的回收率。

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