做基因递送实验，腺病毒、慢病毒、AAV 该选哪个？

对于转染困难的细胞，科研工作者通常会选择病毒来导入目的基因。目前，腺病毒、慢病毒和腺相关病毒是常用的病毒载体工具。那么如何选择适合您实验体系的病毒工具，请参考下面3种病毒工具的比较：

一、慢病毒

优点:

1、宿主范围广：慢病毒能够有效地感染分裂细胞、非分裂细胞，特别适合于一些难转染的细胞(如原代细胞、干细胞、不分化的细胞)和对腺病毒感染具有较强免疫反应的细胞(如树突状细胞、单核细胞和间充质干细胞)等，显著提高目的基因转导效率;

2、适于构建稳转株：慢病毒能将外源基因有效地整合入宿主染色体上，介导目的基因长期、稳定的表达;

3、适用范围更广：不仅能用于体外实验，还能用于活体动物模型，尤其是动物成瘤实验。

缺点：有随机插入突变风险（致癌潜在）、体内免疫原性高于 AAV。

什么时候选慢病毒？

体外实验：构建稳定过表达 / 敲低（shRNA）细胞系；药物筛选、长期基因功能研究；干细胞 / 原代细胞基因修饰。

体内实验：脑局部注射、需要长期表达（免疫压力不大）；CAR-T、体外编辑后回输（ ex vivo ）。

二、腺病毒

优点:

1、宿主细胞范围广：包括分裂细胞和非分裂细胞(某些抗腺病毒感染的淋巴瘤细胞除外)；

2、感染效率高：在理想感染条件下，感染率可达100%；

3、病毒滴度高：纯化、浓缩后可达10^10-11pfu/mL；

4、易于扩增：腺病毒可直接二次扩增，慢病毒和腺相关病毒需要重新包装；

5、不整合到染色体中，无插入致突变性；

6、理化性质稳定：4°C:数周，-80°C:数年。

缺点：免疫原性极强；表达短暂（1–2 周）；细胞毒性相对高。

什么时候选腺病毒？

体外：短期快速过表达（信号通路、蛋白功能、酶活）；大片段基因、多顺反子、大启动子。

体内：疫苗载体；溶瘤病毒、肿瘤局部瞬时治疗。

三、腺相关病毒（AAV）

优点:

1、宿主范围广：可高效感染分裂和非分裂细胞；

2、组织特异性高：多种血清型和特异性后动子，联合运用不同重组酶系统，实现外源基因高特异性表达；

3、安全性高：ITR序列和Rep/Cap基因分别由独立质粒表达，未发现对人体致病；

4、免疫原性低：重组AAV不带有病毒功能及结构蛋白，用于基因治疗基本不引起免疫反应；

5、体內感染效率高。

缺点：

容量最小（<4.7 kb）；分裂快的细胞会逐渐丢失（不适合肿瘤 / 增殖旺盛细胞）。

什么时候选 AAV？

体内实验：神经、肌肉、肝、心脏、视网膜等非分裂 / 慢分裂组织；长期在体表达、基因治疗模型。

体外：不希望整合、短期 / 中期观察；小基因（<4.7 kb）、原代神经元 / 心肌细胞。