DNA测序仪发展历史和注意事项

手工测序以及自动测序均属于DNA序列测定，手工测序可分为maxam-gilbert化学降解法与sanger双脱氧链终止法，事实上，目前dna序列分析的主流是自动测序。373型、377型、310型、3700和3100型等多种型号DNA测序仪均已经被美国pe abi公司生产出来了，在这几款DNA测序仪中，临床检测实验室使用Z多的一种型号要属310型。

发展历史

70年代末，化学法和双脱氧手动测序，同位素标记法分别由WalterGilbert与FrederickSanger发明出来。

80年代中期，应用双脱氧终止法原理，自动测序仪出现了，同位素被荧光取代了，计算机图象识别。

90年代中期，测序仪得到了重大改进，凝胶电泳由集束化的毛细管电泳取代了。

2001年，人类基因组框架图被完成。

注意事项

1．bigdye荧光标记终止底物循环测序试剂盒为本实验使用的测序试剂盒，通常650bp左右为可测dna长度，(98.5±0.5) %为本仪器dna测序精确度，如果仪器所需测定的长度高于650bp，不能辨读的碱基n<2%，那么就需要设计另外的引物。能够设计反向引物对同一模板进行测序，相互印证以便确保更为准确地测序。能够人工核对n碱基，有时能够将其辨读出来，为了使测序的精确度提高，按照星号提示位置，能够对该处彩色图谱进行人工分析，进一步核对该处碱基。

2.对于测序用户，仅仅需要将好的dna样品和引物提供，一个测序pcr反应使用不一样的模板，也就需要不同的dna量，pcr测序只需要比较少的模板的量，通常双链dna需200～500ng，单链dna需50～100ng，pcr产物需30～90ng，dna的溶解Z好不要使用te缓冲液，而是使用去离子水或三蒸水。使用去离子水或三蒸水配成3.2pmol/μl的引物比较好

3、abi prism 310基因分析仪为精密仪器，必须由专人负责操作、管理和维护。

4、5μl为实验测序pcr反应的总体积，并且没有添加矿物油进行覆盖，因此，pcr管盖的密封性尤为重要，不仅需要在完成试剂添加后将pcr管盖盖紧，而且Z好选用pe公司的pcr管。如果在结束pcr以后，pcr液体积低于4～4.5μl，那么表明该pcr反应可能失败，纯化和上样也就没有必要。

现状和意义

在DNA测序商业化的浪潮下，完成5个以上有重大经济价值的基因或蛋白的转化应用、约500个新的功能基因的发现，10000种微生物、100种动植物基因组测序等目标在我国《生物产业发展“十二五”规划》中被提出。根据30-50万元为微生物进行“基因组完成图”测序的大致费用而言，千亿元级别为DNA测序带来的市场容量，其还只是DNA测序商业应用市场的冰山一角。

DNA测序方法的飞速发展除了使人类的全基因组序列为我们所知晓，而且还使得我们充分掌握了小麦、水稻、家蚕以及很多细菌。此时，科学家们的新目标也就变成了对一段序列所代表的生物学意义的探明。用于编码基因仅仅只有1.5%存在于核苷酸组成的庞大序列中，除此以外，扮演调控基因表达的角色有少许，其中功能未知的“垃圾DNA”占绝大部分，这一发现是科学家通过分析人类基因组序列获得的。由表面可知，人与人之间有着缤纷复杂的不同之处，然而，深入到DNA水平上，却仅仅存在0.1%基因编码序列上的不同。大多数时候，人与人之间在一条序列上的差异只有一个核苷酸，科学家将这种现象命名为单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，简称SNPs）。