黄连中盐酸小檗碱的固相萃取方法(Copure® HLB)

盐酸小檗碱介绍

盐酸小檗碱又称黄连素，是一种重要的生物碱，可从黄连、黄柏、三颗针等植物中提取。它对多种细菌如痢疾杆菌、结核杆菌、肺炎球菌、伤寒杆菌及白喉杆菌等都有YZ作用，其中对痢疾杆菌作用Z强，常用来ZL细菌性胃肠炎、痢疾等消化道疾病。临床主要用于ZL细菌性痢疾和肠胃炎。

逗点生物开发出使用固相萃取法检测黄连中盐酸小檗碱，回收率101.7 %，RSD 0.9 %，为客户提供关于盐酸小檗碱检测有效的解决方案。

一、实验目的

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测黄连中盐酸小檗碱的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

盐酸小檗碱(CAS:141433-60-5)。

三、应用范围

本方法适用于黄连中盐酸小檗碱检测的HPLC检测及确证。

四、实验材料

biocomma® Copure® HLB 60 mg/3 mL(Cat. No. COHLB360)。

五、实验方法

1、样品提取

准确称取黄连0.5 g，加入25 mL水，加热煮沸10 min（防止烧干），冷却至室温过滤；再25 mL水淋洗提取物，Z后定容至50 mL；取5 mL用水稀释至50 mL，取5 mL备用。

2、SPE净化

(1)活化：HLB固相萃取柱使用前依次用3 mL甲醇、3 mL 水活化。

(2)上样和洗脱：往固相萃取柱中加入备用提取液，弃去流出液；加入3 mL 15 %甲醇水溶液淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱；再用3 mL甲醇溶液洗脱，收集洗脱液（整个上样、洗脱过程流速控制在1 mL/ min内）。

(3)重新溶解：洗脱液于50 ℃下氮吹至近干，用甲醇定容至1 mL，涡旋1 min，过滤供HPLC测试。

3、HPLC条件

设备：Waters Alliance 2695

色谱柱：InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)

检测器：Waters 2487 紫外检测器

检测波长：298 nm

梯度洗脱：A：甲醇   B：0.1 %甲酸水

表1  梯度洗脱条件

流速：1.0 mL/min

进样体积：20 μL

七、实验结果

1、20.0 mg/kg黄连中盐酸小檗碱的添加回收结果

表2  20.0 mg/kg黄连中盐酸小檗碱的添加回收结果

2、添加水平为20.0 mg/kg盐酸小檗碱标准液相色谱图

图1  添加水平为20.0 mg/kg盐酸小檗碱标准液相色谱图

结论：本方法平均回收率为101.7 %，RSD为0.9 %，满足标准要求。