牛奶中氯霉素检测的固相萃取方 法（Copure® C18）

一、样品提取 

准确称取牛奶 5.00 g( 精确到 0.01 g)，加入乙酸乙酯 15  mL，涡旋振荡 1 min，摇床振荡 10 min；3000 r/min 转速离心 10 min。将上清液转移至试管中，于 45℃氮吹吹干，用 5 mL 乙腈 / 水溶液 (5:95, v/v) 溶解，待净化。

二、SPE 柱净化（Copure® C18，500 mg/6 mL） 

活化：C18 固相萃取柱使用前依次使用 5 mL 甲醇和 5 mL 水 活化。 

上样和洗脱：将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中，以 1 mL/min的流速过柱，弃去滤液。用 4 mL乙腈 /水溶液 (5:95,  v/v) 分两次淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液，抽干小柱。用 8  mL 乙酸乙酯洗脱固相萃取柱，收集洗脱液。 

重新溶解：洗脱液于 45℃氮吹吹干，用 1 mL乙腈 /水溶液 (2:8,  v/v) 定溶，0.22 µm 微孔滤膜过滤，供高效液相色谱测定。

三、仪器条件 

设备：Waters Alliance 2695 色谱柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器：Waters 2487 紫外检测器 检测波长：268 nm 流动相：A：水 B：甲醇 洗脱方式：等度洗脱，A: B=40: 60 流速：1.0 mL/min 进样体积：20 µL 

四、实验结果 

表 1 牛奶基质中氯霉素的 0.5 mg/kg 添加回收结果