Southern印迹杂交的流程

分子杂交（molecular hybridization）是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸（叫做探针）间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。下面就让小编带你了解一下Southern杂交方法。

流程

制备待测核酸样品

1.将细胞破碎或者裂解

2.对基因组DNA进行抽取纯化

3.利用限制酶将DNA消解为大小不一的DNA片段

电泳分离待测DNA样品

能够通过核素标记所用的分子量标准，杂交后的标准分子量DNA亦可以显影出条带

凝胶中核酸变性

如果DNA片段的分子量高于10kb，那么需要的转移时间将会很长。因此，必须控制DNA片段的Z长长度小于2kb。

若靶序列在5kb以上，那么需要进行脱嘌呤处理。

脱嘌呤处理步骤：

在0.25mol/L HCl中浸没入凝胶，在室温环境下轻微地摇晃，一直到溴酚蓝的颜色变为黄色为止。然后再将凝胶在灭菌双蒸水中浸没。

若靶序列在5kb以下，那么直接进行如下步骤

1.在变性液中浸没凝胶，在室温环境下30min，轻微地摇晃，再将凝胶在灭菌双蒸水中浸没，在中和液中浸没凝胶，在室温环境下30min，Z后在20?SSC中使凝胶平衡不少于10min。

Southern印迹

在高盐条件下，利用毛吸作用使得凝胶中的DNA向硝酸纤维素滤膜转移，在烘干固定之后就能够用来杂交，该方法是Southern发明，所以，又被叫做Southern印迹。

转移方法：

1.电转法

2.真空转移法

3.毛细管虹吸印迹法