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FPLC全称为快速蛋白液相色谱(Fast protein liquid chromatography),其原理与GX液相色谱理论类似,是由经典的液体柱层析引入气相色谱理论,并且对相体进行了改革,配用高压输液泵,采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。
FPLC技术基本实验方案
实验原理
FPLC(fast protein liquid Chromatography)为一种特殊的GX液相层析(HPLC,high pressureliquid chromatography)装置,快速分离纯化和定量测定蛋白质组分是它的主要用途。他的本原理相同于HPLC,就是在高压条件下(20—200 kg/cm2),通过在液相载体中分离物质的迁移速率的差异来进行分离纯化。
采用HPLC来对生物大分子分离纯化时,因为液相载体通常是有机溶剂,容易变性失活生物大分子,使得生物大分子的回收率降低。同时,采用非惰性的不锈钢来对HPLC系统的流通线路进行制造,金属离子工作状态下可能会发生解离,从而对某些蛋白质组分吸附。
FPLC的层析柱为耐高压的有机玻璃管,用耐高压的非金属材料制成其它管道,同时采用惰性液相载体,能够使蛋白组分安全快速地分离。所以FPLC对HPLC的操作简易、重复性强、分离速度快等特点加以保留,并且在生物大分子分离纯化过程中分辨率和实用性更加的高。FPLC有其专用预装柱,分子筛、离子交换、疏水层析等各类层析柱也配备了,广泛应用于生物学、化学和环境科学等领域。
实验用品
(一)器材
FPLC装置(Water公司)进样器。
(二)试剂
(1)洗脱缓冲液。
(2)20%乙醇。
(三)材料
若干待测蛋白质样品。
实验程序
1.对仪器连接情况进行检查,将电源开关打开
2.在控制台上对流速、纸速加以设计
3.经加样阀加样:在Injection位置放置阀杆,样品使用注射器加入。再扳阀杆至Load位置,样品进入层析柱。
4.对进样时间进行记录,之后依次用不同缓冲液洗脱。对各管组分进行收集。
5.结束实验之后,以20%乙醇对管道进行冲洗,将电源关闭,做好记录 。
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