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分子杂交(molecular hybridization)是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸(叫做探针)间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。下面就让小编带你了解一下Southern杂交方法。
DNA变性
概念
DNA变性是指两条DNA链间的氢键在某些理化因素的作用下断裂成单链的过程。
变性方法:
1.化学试剂变性
例如双链核酸分子链间的氢键在尿素、甲酰胺、甲醛等化学试剂的作用下断裂。
2.酸碱变性:
双链核酸分子链间的氢键当PH值大于10或者小于3时会发生断裂。
3.热变性
双链核酸分子链间的氢键在温度升高到90-100摄氏度时会完全断裂。
复性
概念
复性或者杂交指的是在一定的条件下,根据碱基互补原则,变性的单链核酸分子重新结合成双链核酸的过程。
如寡核苷酸和RNA、寡核苷酸和DNA、RNA和RNA、RNA和DNA以及DNA和DNA这些具有互补序列的两条单链核酸均能够互补形成双链。
复性过程
1.单链分子之间发生碰撞使局部双链形成。
2.如果局部双链周围的碱基不配对,那么双链即会重新解离。
3.如果如果局部双链周围的碱基配对,那么就会使ZX序列形成。
4.完整的双链分子形成。
分子杂交的一般步骤
1.对DNA或者RNA样品进行制备
2.结合固定基质
3.在80摄氏度下真空固定
4.预杂交
5.将标记探针加入进行杂交
6.洗涤
7.放射自显影或显色反应
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