氨基酸分析仪的工作原理和操作方法

用来进行蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的测定的仪器，称为氨基酸分析仪。必须先蛋白质及肽水解成单个氨基酸，然后再进行氨基酸分析。其是以阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定为基准的离子交换色谱仪。下面就让小编带你了解一下氨基酸分析仪的工作原理，操作方法以及指标信息。

这些有色产物对570nm、440nm光的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸的浓度（或含量）之间的关系和比耳定律相符，能够和标准氨基酸比较作定性和定量测定。

工作原理

由于氨基酸组分的结构、酸碱性、极性及分子大小存在差异，能够从阳离子交换柱上分离出它们，通过对不同pH值离子浓度的缓冲液的利用依次洗脱下各氨基酸组分，再以另yi流路的茚三酮试剂逐个混合，之后共同往螺旋反应管中流入，在一定温度下（一般是115～120摄氏度）进行显色反应，从而使在在570nm有Z大吸收的蓝紫色产物形成。其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物，440nm为Z大吸收。

操作方法

样品处理

对样品中各种游离氨基酸含量进行测定，能够将脂肪杂质除去，直接上柱进行分析。

必须先经过酸水解才能够对蛋白质的氨基酸组成进行测定，上柱分析之前，必须使蛋白质完全变成氨基酸。

样品分析

经过处理后的样品上柱进行分析。按照所用自动分析仪的灵敏度来确定上柱的样品量。通常是每种氨基酸大约0.1μmol（水解样品干重大约为0.3mg）。必须在pH5～5.5、100摄氏度下进行测定，10～15分钟为反应进行的时间。在570nm 波长下进行生成的紫色物质的比色测定。在440nm 波长下进行生成的黄色化合物的比色测定。一个氨基酸全分析通常仅要大约一个小时，可以同时往仪器中装入几十个样品，按照顺序自动分析，Z后数据会自动计算给出，非常精确。±1～3%为仪器的精度。

结果计算

各种氨基酸的定量结果可以通过带有数据处理机的仪器自动打印出来，不然，能够用尺子测量峰高或用峰高乘以半峰宽确定峰面积来将氨基酸的精确含量计算出来。除此以外，氨基酸的种类能够根据峰出现的时间进行确定。

指标信息： 

峰面积重现性：RSD≤1% (水解，所有峰)

保留时间重现性：RSD≤0.5% (水解，所有峰) 

分辨率：THR-Ser Ile-leu ≥98%