液相色谱仪故障分析

　　液相色谱仪是利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。液相色谱仪在生物化学、生物医学、环境化学、石油化工等领域均有广泛应用。

液相色谱仪柱压问题

　　液相色谱仪柱压问题是使用液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI(3.3Bar)之间(在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的)。压力过高、过低都属于柱压问题。

　　1、压力过高

　　这是液相色谱仪在使用中Z常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此时，我们应该分段进行检查。

　　①首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。

　　处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查;

　　②打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。

　　处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100PSI(6.7Bar)以下，过滤白头正常，在检查;

　　③把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。

　　处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在液相色谱仪上，用流动相冲洗柱子。这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。

　　2、压力过低

　　液相色谱仪压力过低的现象一般是由于系统泄漏，处理方法：寻找各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。当然还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体。

　　处理方法：打开Purge阀，用3~5ml/min的流速冲洗，如果不行，则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。

液相色谱仪漂移问题

　　主要包括基线漂移和保留时间漂移。

　　1、基线漂移

　　一般说来，液相色谱仪刚起动时，基线容易漂移，大概要半个小时的平衡时间，如果你用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长，但如果你在实验过程中发现基线漂移，则你要考虑下面的原因：

　　①柱温波动：控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。

　　②流通池被污染或有气体：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(Z好断开柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。

　　③紫外灯能量不足：更换新的紫外灯。

　　④流动相污染、变质或由低品质溶剂配成：检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。

　　⑤样品中有强保留的物质(高K'值)以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线：使用保护柱，如有必要，在进样之间。液相色谱仪分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

　　⑥检测器没有设定在Zda吸收波长处：将波长调整至Zda吸收波长处。

　　⑦流动相的PH值没有调节好：加适量的酸或碱调至Z佳PH值。

　　2、保留时间漂移

　　保留时间重现是液相色谱仪性能好坏的一个重要标志，同一种东西，两次的保留时间相差不要超过15s，超过了半分钟可看做保留时间漂移，就无法进行定性，要考虑以下原因：

　　①温控不当：调好柱温，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。

　　②流动相比例变化：检查四元泵的比例阀是否有故障。

　　③色谱柱没有平衡：在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。

　　④流速变化：重新设定流速。

　　⑤泵中有气泡：从泵中除去气泡。

液相色谱仪峰型异常问题

　　峰型问题是液相色谱仪的主要问题，在做液相过程中，就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。

　　1、色谱图中未出峰：系统未进样或样品分解;液相色谱仪泵未输液或流动相使用不正确;检测器设置不正确;针对以上情况成因作相应调整即可。

　　2、一个峰或几个峰是负峰：流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。

　　3、所有峰均为负峰：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;光学装置尚未达到平衡。

　　4、所有峰均为宽峰：系统未达到平衡;溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;色谱柱尺寸及类型选择不正确;色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;温度变化造成的影响。

　　5、所出峰比预想的小：样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确.定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。

　　6、出现双峰或肩峰：液相色谱仪进样量过大;样品浓度过高;保护柱或色谱柱柱头堵塞;保护拄或色谱柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。

　　7、前伸峰：进样量或样品浓度高;溶解样品的溶剂较流动相极性强;保护柱或色谱柱污染或失效。

　　8、拖尾峰：柱超载，降低样品量;增加柱直径采用较高容量的固定相;峰干扰，对样品进行清洁过滤;调整流动相;硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值;柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢;加在线过滤器，对样品进行过滤;死体积或柱外体积过大，将连接点降至Zdi;尽可能使用内径较细的连接管;柱效下降，更换柱子;采用保护柱，对柱子进行再生。

　　9、出现平头峰：液相色谱仪检测器设置不正确;进样体积太大或样品浓度太高。

　　10、出现鬼峰：进样阀残余峰，在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统;样品中存在未知物，改进样品的预处理;流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤;尽可能使用HPLC级试剂;流路中有小的气泡，打开Purge阀，加大流速排除。